Ջրի, հողի, օդի մանրէաբանական մեթոդները

Միկրոօրգանիզմները բնության մեջ տարածված ամենափոքր, հիմնականում մեկ բջջային արարածներ են: Նրանք հայտնաբերվում են բոլոր միջավայրերում (օդ, հող, ջուր), մարդու մարմնում եւ կենդանիների մեջ, բույսերի մեջ:

Որակի բազմազանությունը եւ միկրոօրգանիզմների քանակը հիմնականում կախված են սննդային միացությունների վրա: Այնուամենայնիվ, մեծ նշանակություն ունեն նաեւ խոնավությունը, ջերմաստիճանը, օդափոխությունը, արեւի ճառագայթների գործողությունը եւ այլ գործոններ:

природных сред позволяют выявить наличие патогенных микроорганизмов, определить их количество и, в соответствии с полученными результатами, выработать меры по устранению или предупреждению инфекционных заболеваний. Բնական մեդիայի սանիտարա-մանրէաբանական ուսումնասիրության մեթոդները թույլ են տալիս պարզել պաթոգեն միկրոօրգանիզմների առկայությունը, որոշել դրանց թիվը եւ ստացված արդյունքներին համապատասխան մշակել վարակիչ հիվանդությունների վերացման կամ կանխարգելման միջոցներ: Բացի այդ, քանակական հաշվառումն անհրաժեշտ է էկոհամակարգերի մոդելավորման եւ բնական գործընթացների կառավարման սկզբունքների մշակման համար: . Եկեք քննենք, թե ինչ են մանրէաբանական հետազոտության մեթոդները :

Հողը

Գիտնականները համարում են վարակիչ պաթոլոգիաների փոխանցման հնարավոր եղանակներից մեկը: Հիվանդների կամ կենդանիների արտահոսքներով, պաթոգեն միկրոօրգանիզմները ներթափանցում են հողը: Նրանցից ոմանք, մասնավորապես, սպորտը, կարող են գոյատեւել երկար ժամանակ (երբեմն մի քանի տասնյակ տարիներ): позволяют определить "микробное число" (кол-во микроорганизмов в грамме грунта), а также коли-индекс (количество кишечных палочек). Հողը սանիտարիա-մանրէաբանական ուսումնասիրության մեթոդները հնարավորություն են տալիս որոշելու «մանրէաբանական թվաքանակը» (միգրանտ հողի մեջ միկրոօրգանիզմների քանակը), ինչպես նաեւ կոլի-ինդեքսը (E. coli- ի քանակը), ինչպես նաեւ հիպերտոնիկ հիվանդությունների կանխարգելման մեթոդները , ինչպիսիք են թթանուսը, սիբիրախտը, բոտուլիզմը եւ այլն: .

Հողի վերլուծություն. Ընդհանուր տեղեկություններ

следует в первую очередь отнести прямое микроскопирование и посев на плотную питательную среду. Մանրէաբանական հողի հետազոտության մեթոդները պետք է նախ եւ առաջ ներառեն ուղիղ մանրադիտակի եւ սերմացուի խիտ սննդարար միջավայրում: Հողում բնակվող միկրոօրգանիզմների եւ նրանց խմբերի բնակիչները տարբերվում են իրենց տաքսոնոմիկ դիրքում եւ էկոլոգիական գործառույթներից: Գիտության մեջ նրանք միասնական են «հողի բիոտա» տերմինի տակ: Հիմնադրամը հսկայական թվով միկրոօրգանիզմների միջավայրն է: Մի գրամ հողում կա 1-ից 10 միլիարդ բջիջ: Այս միջավայրում ընթանում է օրգանական նյութերի տարրալուծումը `տարբեր ստրոֆիտիկ միկրոօրգանիզմների մասնակցությամբ:

Մանրէաբանական հետազոտության մանրադիտային մեթոդը. Փուլեր

Շրջակա միջավայրի վերլուծությունը սկսվում է նմուշառմամբ: Դա անել, օգտագործել նախկինում մաքրված եւ rubbed ալկոհոլային դանակ (կարող եք օգտագործել թիակ). Դրանից հետո նմուշը պատրաստվում է: Հաջորդ քայլն այն է, որ բջիջները լցված կտավների մեջ են: Եկեք յուրաքանչյուր փուլը առանձին դիտարկենք:

Նմուշառում

Վերամշակելով հողեղենի հողը, որպես կանոն, նմուշները վերցվում են ամբողջ շերտի խորությունից: Նախ `հողերի վերեւից 2-3 սմ բարձրացրեք, քանի որ այն կարող է պարունակել օտարերկրյա միկրոֆլորան: Դրանից հետո մոնոլիտները վերցվում են հողի ուսումնասիրված վայրից: Նրանցից յուրաքանչյուրի երկարությունը պետք է համապատասխանի շերտի հաստությանը, որի համար անհրաժեշտ է նմուշ ստանալ:

100-200 քմ մակերեսով տեղում: M, 7-10 նմուշներ են վերցվում: Յուրաքանչյուրի քաշը մոտ 0,5 կգ է: Նմուշները պետք է մանրակրկիտ խառնվեն տոպրակի մեջ: Դրանից հետո, վերցրեք մոտավորապես 1 կգ կշռված միջին նմուշ: Այն պետք է տեղադրվի մի մագաղաթ (ստերիլ) տոպրակի մեջ, որը ներկված է հյուսվածքային տոպրակի մեջ: Անմիջական վերլուծությունից առաջ նմուշը պահվում է սառնարանում:

Հետազոտության նախապատրաստում

Խառը հողը լցվում է չոր ապակին: Նախնական այն պետք է մաքրել ալկոհոլով եւ այրվել այրման վրա: Օգտագործելով spatula, հողը մանրակրկիտ խառնվում է եւ դրել միասնական. Անհապաբար անհրաժեշտ է հեռացնել արմատները, այլ տարրեր: Դրա համար օգտագործվում են պինցետները: Նախքան աշխատանքը, պտուտակները եւ սպաթուլան կալվացվեն այրիչի վրա եւ սառեցված են:

Ստակի բաժանելիս հողամասի փոքր մասերից փոքր մասերը վերցվում են: Դրանք կշռված են տեխնիկական սանդղակի վրա: является специальная обработка образца. Մանրէաբանական հետազոտության մանրադիտակային մեթոդի պարտադիր փուլը նմուշի հատուկ մշակումը է: Անհրաժեշտ է նախապես պատրաստել 2 ստերիլ շշեր: Նրանց հզորությունը չպետք է գերազանցի 250 մլ: 100 մլ թափանցիկ ջուր լցնում է լապտերից մեկի մեջ: Դրանից վերցրեք 0,4-0,8 մլ հեղուկ եւ խոնավացրեք հողը կախվածությունը խոհարար վիճակում: The խառնուրդ պետք է rubbed մատով կամ ռետինե pestle 5 րոպե.

Առաջին շշով ջուրով, հողի զանգվածը փոխանցվում է դատարկ շշով: Այնուհետեւ այն նորից կավճռեց: Դրանից հետո զանգվածը փոխանցվում է այրիչի կրակի մոտ գտնվող շշի մեջ: Լվացքի հետ կապված կոնտեյները 5 րոպեի ընթացքում թափահարում է ռոքերի վրա: Դրանից հետո այն մնացել է մոտ 30 վայրկյան: Դա անհրաժեշտ է, որպեսզի խոշոր մասնիկները լուծվեն: Կես ժամից հետո զանգվածը օգտագործվում է նախապատրաստման համար:

Բջիջների հաշվարկը հաստատված նիհարների վրա

, разработанному Виноградским. Հողի ուղղակի մանրադիտակային ուսումնասիրությունը իրականացվում է Վինոգրսկու կողմից մշակված մանրէաբանական հետազոտության մեթոդով : Պատրաստված կասեցման որոշակի ծավալում հաշվարկվում է միկրոօրգանիզմային բջիջների քանակը: Ֆիքսված կեղեւների ուսումնասիրությունը թույլ է տալիս երկար ժամանակ պահել թմրամիջոցները եւ կատարեք հաշվարկներ ցանկացած հարմար ժամանակում:

Դեղերի պատրաստումը հետեւյալն է. Կախոցի որոշակի ծավալի (սովորաբար 0,02-0,05 մլ) կիրառվում է սլայդում միկրապիտետի օգտագործմամբ: Դրան ավելացվում է կիտրոնաթթուների լուծույթ (agaropectin polysaccharide խառնուրդներ եւ սեւ ծովից կարմիր ծիրանի արդյունահանվող agarozes), խառնել արագ եւ տարածվել 4-6 քմ տարածքով: Տես Քամին չորանում է օդում եւ ամրագրվում է 20-30 րոպե: Ալկոհոլը (96%): Հաջորդը, նախապատրաստումը խոնավացնում է թորած ջրի մեջ, որը տեղադրվում է կարբոլիկ րերտրոզի լուծարում 20-30 րոպե:

Դանդաղեցուց հետո այն լվանում եւ չորանում է օդում: Բջիջները հաշվվում են ընկղմման նպատակներով:

Խիտ մեդիա սերմանում

позволяют выявить большое количество микроорганизмов. Մանրէաբանական հետազոտությունների մանրադիտային մեթոդները հնարավորություն են տալիս բացահայտել մի շարք միկրոօրգանիզմներ: Սակայն, չնայած դրան, ցորենի մեթոդը համարվում է ամենատարածված գործնականում: Դրա էությունը բաղկացած է խիտ միջավայրում Petri կերակուրի պատրաստման ծավալից (հողի կասեցումը) ցանելով:

позволяет учитывать не только количество, но и групповой, а в ряде случаев и видовой состав микроскопической флоры. Մանրէաբանական հետազոտության այս մեթոդը թույլ է տալիս հաշվի առնել ոչ միայն քանակությունը, այլեւ խմբի բաղադրությունը, եւ որոշ դեպքերում նաեւ մանրադիտակային ֆլորայի տեսակների կազմը: Գաղութների թվաքանակը սովորաբար կազմված է Պետրի ճաշատեսակի ներքո փոխանցված լույսի ներքո: Հաշվարկված հատվածում կետը տեղադրվում է մարկեր կամ թանաքով:

Ջրի վերլուծություն

Ջրի մարմնի միկրոֆլորան, որպես կանոն, արտացոլում է նրա մոտ հողի մանրէաբանական կազմը: имеют особое практическое значение при изучении состояния конкретной экосистемы. Այս առումով, ջրի եւ հողերի սանիտարական եւ մանրէաբանական ուսումնասիրության մեթոդները հատուկ պրակտիկ նշանակություն ունեն որոշակի էկոհամակարգի վիճակը ուսումնասիրելու համար: Թարմ լճերը պարունակում են, որպես կանոն, cocci, գդալով ձեւավորված բակտերիաներ:

Անաորոբները ջրերում հայտնաբերվում են փոքր քանակությամբ: Որպես կանոն, նրանք վերարտադրվում են ջրամբարների ստորին հատվածում, մածուցիկներով, մաքրման գործընթացներին մասնակցում: Օվկիանոսի եւ ծովերի միկրոֆլորան ներկայացված է հիմնականում աղի սիրող (halophilic) բակտերիաների կողմից:

Միկրոօրգանիզմներում փաստացի ոչ մի արտեզյան հորիզոններ չեն հայտնաբերվել: Դա պայմանավորված է հողի շերտի ֆիլտրման ունակությամբ:

считаются определение микробного числа и коли-титра либо коли-индекса. Միկրոբիոլոգիական ջրի թեստավորման ընդհանուր ընդունված մեթոդներն են մանրէաբանական թվերի եւ կոլիտի կամ կոլիկացված ինդեքսի որոշումը: Առաջին ցուցանիշը բնութագրում է 1 մլ հեղուկի մեջ մանրէների քանակը: Coli- ինդեքսը մի լիտր ջրի մեջ ներկա է E. coli- ի քանակն է, իսկ կոլիտե տիտրերը `հեղուկի նվազագույն քանակի կամ առավելագույն լուծույթի, որտեղ դրանք կարող են հայտնաբերվել:

Մանրէաբանական թվերի որոշում

Սանիտարական մանրէաբանական հետազոտությունների այս մեթոդը հետեւյալն է. 1 մլ ջրի մեջ որոշվում է ֆակուլտատիվ անաէրոբների եւ մեսոֆիլիկ (միջանկյալ) aerobes- ի քանակությունը, որոնք կարող են 37 ° C- ում խմել մսի խթանող ագար (հիմնական սննդանյութ): Օրվա ընթացքում գաղութներ ձեւավորելու համար տեսանելի է 2-5 վ. Կամ մերկ աչքով:

является посев. Մանրէաբանական հետազոտությունների այս մեթոդի հիմնական փուլը սերմանում է: Յուրաքանչյուր նմուշի, առնվազն երկու տարբեր ծավալներ են ցանվում: Թափուկ ջրի վերլուծության ժամանակ յուրաքանչյուր բաժակին ավելացնում է 1-0.1 մլ մաքուր հեղուկ եւ 0.01-0.001 մլ աղտոտված հեղուկ: 0.1 մլ կամ պակաս ցանելու համար հեղուկը զտված է տարանջատված (ստերիլ) ջրի հետ: Հավատարիմորեն պատրաստել տասըապատ լուծումներ: Նրանցից յուրաքանչյուրը 1 մլ ավելացնում է երկու Petri- ի ճաշատեսակները:

Խառնուրդները լցվում են սննդային ագարով: Այն պետք է նախապես հալված եւ սառեցված լինի մինչեւ 45 աստիճան: Ակտիվ խառնուրդից հետո միջինը մնում է հորիզոնական մակերեւույթում ամրացնելու համար: 37 աստիճանով: Բույսերը աճում են ողջ օրվա ընթացքում: позволяет учитывать результаты на тех чашках, где количество колоний находится в пределах от 30 до 300. Ստորագրված մանրէաբանական հետազոտությունների մեթոդը հնարավորություն է տալիս հաշվի առնել այն արդյունքները, որոնց վրա գաղութների թիվը գտնվում է 30-ից 300-ի սահմաններում:

Օդը

Այն համարվում է միկրոօրգանիզմների համար տարանցիկ միջավայր: являются седиментация (оседание) и аспирация. Օդի մանրէաբանական ուսումնասիրության հիմնական մեթոդները sedimentation (sedimentation) եւ ձգտում են:

Օդի միջավայրի միկրոֆլորան պայմանականորեն բաժանվում է փոփոխական եւ մշտական: Առաջինն ընդգրկում է խմորիչ, պիգմենտային ձեւավորող կոկկ, սպորտային բազիլներ, ձողեր եւ այլ միկրոօրգանիզմներ, որոնք չորանում են, չորացնում են: Փոփոխական միկրոֆլորայի ներկայացուցիչները, իրենց սովորական միջավայրից օդ մտնելով, չեն երկարացնում իրենց կենսունակությունը:

Մեծ օվկիանոսների օդում միկրոօրգանիզմներն ավելի շատ են, քան գյուղական վայրերի օդային միջավայրում: Ծովերի վրա, մանրէների անտառները շատ քիչ են: Օդի հստակեցումը նպաստում է ձյան եւ անձրեւի: Մանրէների կցված տարածքներում շատ ավելին է, քան բաց տարածքներում: Նրանց թիվը ձմեռային ժամանակաշրջանում ավելանում է պարբերաբար օդափոխության բացակայության պայմաններում:

Չրերը

считается простейшим. Մանրէաբանության մանրէաբանական հետազոտությունների այս մեթոդը համարվում է ամենապարզը: Այն հիմնված է քաղկեդիների եւ մասնիկների լուծարման վրա, բաց աղցանի մեջ արգայի մակերեսի վրա ծանրության գործողության ներքո: Չափման մեթոդը ճշգրիտ չի որոշում օդում առկա մանրէների քանակը: Փաստն այն է, որ բավականին դժվար է բռնել փոշու մասնիկների փոքր մասնիկներ եւ բաց գավաթում մանրէներ: Հիմնականում խոշոր մասնիկները պահպանվում են մակերեսի վրա:

Այս մեթոդը չի օգտագործվում մթնոլորտային օդի վերլուծության մեջ: Այս միջավայրը բնութագրվում է օդափոխության արագության մեծ տատանումներով: Այնուամենայնիվ, քայքայումը կարող է օգտագործվել ավելի բարդ գործիքների կամ էլեկտրաէներգիայի աղբյուրի բացակայության պայմաններում:

Մանրէաբանական թվերի որոշումը կատարվում է Օմելյանսկի մեթոդով: Համաձայն դրա, 5 րոպեի ընթացքում մակերեսի վրա 100 մկգ հեռավորության վրա կախված է: C- ը սահմանում է 10 լիտր օդի մեջ առկա բակտերիաների քանակը:

Պատվիրել 535 «Մանրէաբանական մեթոդների հետազոտության միավորման մասին»

Բակտերիոլոգիական վերլուծությունը կարեւոր տեղ է զբաղեցնում տարբեր վարակիչ հիվանդությունների ախտորոշման, կանխարգելման եւ բուժման ուղղված կլինիկական եւ լաբորատոր աշխատանքների համալիրում: Սակայն դրանք չեն սահմանափակվում շրջակա միջավայրի հետազոտությամբ:

Առանձնապես կարեւոր նշանակություն ունի բժշկական հաստատություններում կենսաբանական նյութի մանրէաբանական վերլուծությունը: Բժշկական հաստատություններում անցկացված հետազոտությունների համար բարձրացվում են պահանջներ: «Հետազոտության մանրէաբանական մեթոդների միավորման մասին» կարգի նպատակն է բարելավել մանրէաբանական ախտորոշման որակը եւ արդյունավետությունը:

Կանանց նեղվածքների մանրադիտային հետազոտություն

Սեռական ճանապարհով փոխանցվող վարակների եւ opportunistic diseases- ի (օպորտունիստական բակտերիաների առաջացման) ախտորոշման հիմնական մեթոդ է:

Մանրադիտային վերլուծությունը թույլ է տալիս գնահատել միկրոֆլորայի որակական եւ քանակական կազմը, ստուգել նմուշառման ճիշտությունը: Օրինակ, արգանդի վզիկի ջրանցքից ստացված աղբի մեջ հեշտոցային էպիտյուլի ներկայությունը վկայում է կենսաբանական նմուշառման կանոնների խախտման մասին:

Հարկ է նշել, որ այս դեպքում մանրէաբանական հետազոտությունը սովորաբար ուղեկցվում է որոշակի խնդիրների: Նրանք կապված են այն փաստի հետ, որ գենետիկ տրակտանի ցածր մասերում սովորաբար տարբեր տարիքային շրջաններում տարբերվում են բազմազան միկրոֆլորան: Ուսումնասիրության արդյունավետության բարձրացման համար մշակվել են միասնական կանոններ:

Վիրուսային վարակների ախտորոշում

Այն իրականացվում է ՌՆԹ-ի եւ ԴՆԹ-ի պաթոգենների հայտնաբերման մեթոդներով: Նրանք հիմնված են հիմնականում պաթոլոգիական նյութի նուկլեոտիդային հաջորդականությունների որոշման վրա: Դրա համար օգտագործվում են մոլեկուլային զոնդերը: Դրանք արհեստականորեն արտադրվում են ռադիոակտիվ նյութի կամ կենսատին պիտակավորված վիրուսային թթուների լրացնող nucleic թթուներ:

Մեթոդի հատուկ առանձնահատկությունն այն է, որ հատուկ DNA հատվածի բազմակի պատճենումը, որը պարունակում է մի քանի հարյուր (կամ տասնյակ) nucleotide զույգերի: Replication մեխանիզմը (պատճենումը) այն է, որ ավարտը կարող է սկսվել միայն որոշակի բլոկների մեջ: Դրանք ստեղծելու համար օգտագործվում են primers (primers): Նրանք սինթեզված օլիգոնուկլեոտիդներ են:

PCR ախտորոշիչ (պոլիմերազային շղթայական ռեակցիա) հեշտ է իրականացնել: Այս մեթոդը թույլ է տալիս արագ արդյունքի հասնել, օգտագործելով փոքր քանակությամբ պաթոլոգիական նյութ: PCR ախտորոշման օգնությամբ հայտնաբերվում են սուր, քրոնիկ եւ թաքնված (թաքնված) վարակներ:

Զգայունության դեպքում այս մեթոդը նախընտրելի է համարվում: Սակայն ներկայումս փորձարկման համակարգերը բավականաչափ հուսալի չեն, ուստի PCR ախտորոշումը չի կարող ամբողջովին փոխարինել ավանդական մեթոդներով: